咨询白癜风专家 http://news.39.net/bjzkhbzy/210716/9192509.html择要：宗旨对制何首乌5种重要药效/毒效成份没食子酸、大黄素、二苯乙烯苷、大黄素甲醚和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷举行生物药方学分类系统（BCS）协商。办法别离采纳均衡熔解度法和外翻肠囊法协商各代表成份的熔解度和浸透性，采纳2种软件PipelinePilot7.5和ChemDraw7.0推断各成份的熔解性和浸透性参数，采纳美国食物药物办理局（FDA）准则别离对代表成份实测值与推断值举行典范BCS分类协商，同时评估其关联性。后果开始断定制何首乌中大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷及大黄素甲醚为BCSIV类药物；二苯乙烯苷和没食子酸属于BCSIII类成份，浸透性是其汲取进程中重要束缚成分。蒽醌类化合物的BCS分类协商存在不同，软件推断存在假阳性。论断采纳体外生物利费用倏地评估办法对制何首乌中5种重要药效/毒效成份举行BCS分类协商，为中药体内汲取推断和体外平安性评估供应协商思绪和测验典范。
生物药方学分类系统（BCS）是根据药物的体外熔解性和肠道浸透性的高下，将药物分红4大类[1]：第I类为高熔解度-高浸透性药物，其熔解性和浸透性不会束缚体内汲取；第II类为低熔解度-高浸透性药物，药物浸透性不会束缚体内汲取；第III类为高熔解度-低浸透性药物，此类药物的体内汲取险些不受剂型成分影响，其跨太小肠上皮细胞的手腕是其汲取的限速环节；第IV类为低熔解度-低浸透性药物，这种药物熔解性和透过性均会束缚汲取，成药性差。暂时，BCS分类系统已成为比年来新药开采和监视办理强有力的器械之一[2-4]。不只用于新药研发阶段候选药物的挑选或举行公道的剂型筹划，还可用于推断药物体表里关联性。
制何首乌PolygoniMultifloriRadixPraeparata始载于《开宝本草》，为蓼科何首乌属植物何首乌PolygonummultiflorumThunb.的枯燥块根的炮成品，具备补肝肾、益精血、乌须发、化浊调脂等工效[5]。中药所含成份繁杂，逐个举行体内进程挑选存在较大的艰巨，BCS为其供应了一种体外生物利费用评估办法，将洪量测验简化为二维参数，重要从影响药物汲取的2个重大参数熔解度和浸透性对药物举行分类，进而对活性或毒性成份举行体外生物利费用评估[4,6-7]，但暂时在中药畛域的运用较少。本协商基于前期协商后果取舍具备肝细胞毒性的没食子酸和大黄素[8-10]，重要活性成份二苯乙烯苷，不同极性的无肝细胞毒性的大黄素甲醚和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷为模子药物[11]，对制何首乌中5种重要药效/毒效成份举行BCS分类协商，为制何首乌所含活性成份的生物药方学分类协商供应数据援助。
1仪器与材料
1.1材料及试剂
二苯乙烯苷（批号W13-3-6）、没食子酸（批号W00-5-4）、大黄素（批号W00-1-5）、大黄素甲醚（批号W05-1-6）、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（批号W17-9-5）对比品均购自天津中新药业股分有限公司，品质分数均＞98%；氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、碳酸氢钠、葡萄糖、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、乙腈（色谱级）购自美国SigmaAldrich公司；盐酸购自天津市科密洋化学试剂有限公司；甲酸（色谱级）购自天津市大茂化学试剂厂。
1.2仪器
Hclass超高效液相色谱仪，美国Waters公司；Milli-Q超纯水仪，美国Millipore公司；H-W离神思，长沙湘仪离神思仪器有限公司；TK-20B型透皮分散仪，上海锴凯科技商业有限公司；BPS十万分之一天平，德国Sartorius公司；SB-D数控超声波洗涤器，宁波新芝生物科技股分有限公司。
1.3测验动物
壮健雄性大鼠，品系SD（Spraque-Dawley），级别平常，体品质（±10）g，由华夏军事科学院供应，同意证号SCXK-（军）-，动物伦理查察允许号TJAB-TJU。
2办法
2.1对比品溶液的制备
别离精细称取二苯乙烯苷4.34mg、没食子酸4.90mg于10mL量瓶中，称取大黄素1.52mg、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷2.35mg、大黄素甲醚1.50mg于25mL量瓶中，甲醇定容即得对比品贮备液。
2.2色谱前提
WatersBEHRPC18色谱柱（mm×2.1mm，1.7μm）；崎岖相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）；采纳等度洗脱[11-12]：二苯乙烯苷（15%A∶85%B，nm）；没食子酸（10%A∶90%B，nm）；大黄素（55%A∶45%B，nm）；大黄素甲醚（60%A∶40%B，nm）；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（30%A∶70%B，nm）；体积流量0.2mL/min；柱温35℃；进样量5μL。
精细度、反复性、波动性实验中没食子酸、大黄素、二苯乙烯苷、大黄素甲醚和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的保存工夫RSD＜2%、峰面积RSD＜3%，均合适请求，讲明精细度、反复性精良，样本溶液在24h内波动。5种成份的平衡加样回收率别离为99.8%、.2%、.2%、98.7%、96.9%（n＝6），均合适办法学考核请求。
没食子酸、大黄素、二苯乙烯苷、大黄素甲醚和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的线性回归方程别离为Y＝X＋，r＝0.；Y＝X＋，r＝0.；Y＝.5X＋.4，r＝0.；Y＝.6X＋.1，r＝0.；Y＝.57X＋.12，r＝0.；后果讲明没食子酸、大黄素、二苯乙烯苷、大黄素甲醚和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷别离在10～50mg/mL、0.05～20μg/mL、10～mg/mL、1～40μg/mL、0.22～6.94μg/mL线性相干精良。
2.3溶液配制
2.3.1Krebs-Ringer’s肠养分液的配制称取NaCl8.00g、KCl0.20g、MgSO40.26g、NaH2PO40.g、NaHCO31.00g加水熔解，临用前别离参加CaCl20.20g和葡萄糖1.00g，边搅拌边参加超纯水定容至1L。
2.3.2浸透性样本溶液的配制精细称取二苯乙烯苷、没食子酸、大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚对比品适当，加K-R液熔解并定容至mL，即得二苯乙烯苷52.0μg/mL、没食子酸52.7μg/mL、大黄素24.0μg/mL、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷18.4μg/mL、大黄素甲醚22.7μg/mL的供试品溶液。
2.4制何首乌重要成份的均衡熔解度协商
根据FDA准则办法举行均衡熔解度[13]的测定，取过多的各成份于mL超纯水中，在37℃水浴中、60r/min下磁力搅拌均衡24h，使各成份在超纯水（pH7.0）中饱和，取μL饱和溶液于10r/min离心5min，超纯水稀释后，UPLC解析，测验平行3组举行以保证后果的确切性。
2.5制何首乌重要成份的透过性协商
测验根据文件办法并在测验室恰当的前提下举行[14]。大鼠测验前禁食12h，自在饮水，麻醉后沿腹白线剖开腹部，快捷掏出10cm左右肠段登时放入氧气饱和的冷的Krebs-Ringer’s肠养分液中洗涤，撤废浆膜层表面的脂肪构造，用玻璃棒将肠道翻转使黏膜面朝外，洗净体例物，切去两头各1cm，一端结扎，另一端系于剪去底部的内衬管上，向肠囊内注入空白Krebs-Ringer’s液。均衡5min，将肠囊置于37℃恒温并盛有mL肯定品质浓度的各药液的烧杯中，恒流泵通空气。别离于15、30、60、90、min取样0.2mL，同时增长等体积、新鲜且37℃恒温的空白Krebs-Ringer’s肠养分液，取样后衡量各肠段的长度和内径，筹划肠囊的表面积。样本在10r/min下离心5min，取上清液UPLC进样解析，测验平行3组举行以保证后果的确切性。
3后果
3.1制何首乌各成份在超纯水中的熔解度
依照典范BCS理论，参考FDA对BCS熔解性的准则评判药物熔解度高下：在37℃，pH值在1～6.8时，剂量数（D0）≤1，为高熔解性，反之则为低熔解性。D0是反响药物熔解性与口服汲取相干的参数，显露了药物的熔解本能。
经过筹划，二苯乙烯苷、没食子酸、大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷在水中的均衡熔解度（Cs）别离为.00、20.00、0.12、4.54μg/mL（n＝3）。其次，根据公式D0＝D/(V0Cs)筹划D0（此中D为药物的剂量，制何首乌的逐日最大剂量为12g，聚集《华夏药典》以及关联文件报导[15-18]，遵循制何首乌的逐日最大口服剂量断定二苯乙烯苷、没食子酸、大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的逐日最大剂量别离为84.0、18.52、6.00、6.00、34.32mg；V0为熔解药物所需的体液体积，遵循模范生物等效性测验协定规矩[1]为mL；Cs为药物的熔解度）。
依照上式筹划获得制何首乌各代表性成份二苯乙烯苷、没食子酸、大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷在超纯水介质中的D0别离为4.39×10?3、6.16×10?3、、＞24、30.24。后果显示二苯乙烯苷、没食子酸为高熔解性成份，大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷为低熔解性成份，而大黄素甲醚在超纯水介质中根底没法探测到，也属于低熔解性成份。
3.2制何首乌中重要成份的浸透性协商
制何首乌中二苯乙烯苷和没食子酸在各工夫点的单元肠管面堆集积汲取量（Qn）见图1，别离筹划取样起点时（min）不同药物在肠中的积聚汲取量（Qz）、浸透系数（Papp）以及汲取率（P），考核药物对肠汲取的影响，后果见表1。
Ci为各取样点品质浓度，V为肠段体积，Vi为取样体积，A为肠段表面积，t为取样起点工夫，C为样本初始品质浓度
二苯乙烯苷和没食子酸在不同肠段的积聚汲取存在肯定不同，二苯乙烯苷在十二指肠的汲取最佳，而没食子酸在空肠段的汲取最佳。
浸透性高下的评判准则之外翻肠囊法获得的美托洛尔Papp值为判定准则，Papp≥8.4×10?5cm/s为高浸透性物资，反之则为低浸透性物资，由此可知本测验中二苯乙烯苷和没食子酸均为低浸透性物资，大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷没法透过肠壁，也为低浸透性物资。
3.3制何首乌重要药效/毒效成份的典范生物药学分类协商
3.3.1基于测验办法的制何首乌代表成份典范BCS分类根据典范BCS分类准则[19]对制何首乌中代表成份举行BCS分类，后果如图2。此中，二苯乙烯苷（THSG）和没食子酸均为BCSIII类药，大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷均为BCSIV类药。
3.3.2基于软件模仿筹划制何首乌中代表成份典范BCS分类协商采纳PipelinePilot7.5[20]推断制何首乌重要药效毒效成份在25℃水中的熔解度（lgS）及AlgP值，并聚集制何首乌各代表成份的服药量盘算出D0。采纳ChemDraw7.0[21]推断获得各代表成份的油水份派系数（lgP），详细后果见表2。依照推断后果对制何首乌中5种代表性成份举行BCS分类。以美托洛尔为参比物资，lgP≥1.为高浸透性药物，反之则为低浸透性药物。根据典范BCS分类准则[19]对制何首乌代表成份举行BCS分类。基于软件推断值D0-lgP的制何首乌代表成份典范BCS分类后果（图3）与基于D0-AlgP的典范BCS分类后果雷同，二苯乙烯苷（THSG）、没食子酸与大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷为BCSIII类药，而大黄素、大黄素甲醚为BCSI类药。
3.3.3软件推断值假阳性与假阴性后果排查以推断D0值为横坐标，实测D0值为纵坐标，对软件推断获得的熔解性参数D0举行假阳性、假阴性后果排查。以熔解性高下临界值1为准则，坐标轴缔交在点（1，1）处，以此断定坐标象限图，如图4，可知软件推断的大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚的D0值为假阳性后果。
之外翻肠囊法获得的制何首乌各代表成份的浸透系数Papp为准，对软件推断获得的浸透性参数lgP假阳性、假阴性后果举行排查，如图5可知，大黄素和大黄素甲醚的lgP值为假阳性后果。
4议论
本协商在前期协商根本上操纵测验办法及两种软件模子对制何首乌中重要药效/毒效成份举行生物药方学分类协商，对口服中药制何首乌的多种成份举行生物利费用的体外评估。在考核BCS办法对中药活性成份合用性的同时，评估测验办法与软件推断办法对制何首乌各代表成份BCS分类后果的关联性。
测验办法BCS分类后果开始断定制何首乌中大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷及大黄素甲醚为BCSIV类药物，依照软件推断值及分类准则大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷被分为BCSIII类药物，而大黄素和大黄素甲醚为BCSI类药物，蒽醌类成份BCS分类协商中测验办法和软件推断后果存在不同。协商发掘本质中，大黄素和大黄素甲醚为多羟基的蒽醌类化合物，具备肯定的酸性，在pH7.0超纯水介质中难以成盐，熔解性不好，故为低熔解性药物，与文件报导根底一致[22]，而在软件模仿中推断为易溶性致使分类后果浮现假阳性。文件报导的大黄素透过性测验多采纳饱和甲醇溶液稀释而成，且参加N,N-二甲基甲酰胺来增长其熔解度，故浸透性较好[23-24]；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷为含蒽醌类构造的大分子化合物，在软件模仿筹划中做为糖苷类成份，熔解性推断后果较好，与测验后果存在较大不同[25]，阐明现有的BCS推断办法对蒽醌类成份并不绝对合用，有待进一步改善。
制何首乌重要药效成份二苯乙烯苷为多羟基酚类化合物，高浓度下具备体外肝细胞毒性的没食子酸为有机酸，两者水溶性均精良，属于高熔解性物资，其测验值与软件推断后果一致，均为BCSIII类药物，透过性是药物汲取进程中重要的束缚成分，思索到药物本质的操纵和调理进程，BCSIII类药物在合适倏地溶出前提下，极有也许经口服汲取加入体内，经肝脏代谢积聚表现药效或毒效影响。本协商所开采的办法对制何首乌中多种活性或肝细胞毒性成份的体外生物利费用与体内汲取做出开始推断，可认为中药有用成份成药性评估及平安性体外评估供应新的思绪与本领援助。
参考文件（略）
来历：曹雪晓，任晓亮，王萌，孙立丽，邓雁如．制何首乌中重要药效/毒效成份的生物药方学分类系统评估协商[J].中草药,,51(13):-.
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